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cck8試劑實驗過程中的疑難解答（一）News
cck8試劑實驗過程中的疑難解答（一）
更新時間：2018-03-12 點(diǎn)擊次數(shù)：9088次
對于cck8試劑的使用相比于多用戶都充滿了疑惑，在實驗的過程中也經(jīng)常會遇到一些難題，寸步難行，今天呢小編就總結(jié)下實驗中客戶常見問題相關(guān)疑問解答供大家參考下吧
1.cck8試劑與胸苷結(jié)合檢測之間是否有相關(guān)性？
有。然而，請注意由于cck8試劑使用的檢測原理與胸苷檢測的不同，因此結(jié)果可能不同。
2.cck8試劑能否檢測細(xì)菌細(xì)胞？
可以檢測E.coli，但不能檢測酵母細(xì)胞。向100 μl E.coli培養(yǎng)液中加入10 μl cck8試劑溶液，并培養(yǎng)1-4個小時或guo夜。
3.cck8試劑穩(wěn)定嗎？
cck8試劑在0-5℃下能夠保存至少6個月，在-20℃下避光可以保存1年。如果需要長期保存，我們推薦-20℃的儲藏條件。
4.如果沒有450 nm的濾光片，還可以使用哪些其他濾光片？
還可使用450 nm到490 nm之間的濾光片。
5.如何減少由于cck8試劑在槍頭上或孔壁上的殘留所帶來的誤差？
可以在加樣前用培養(yǎng)基稀釋cck8試劑并混勻后加樣。
6.cck8試劑是什么顏色？
應(yīng)該是粉紅色。若顏色不一樣，有可能會影響測定。
7.CCK8能否對活細(xì)胞進(jìn)行染色？
不能。因為CCK8的主要成分是一種水溶性的四唑鹽 (WST8)，并通過電子載體1Methoxy PMS將活細(xì)胞中的電子交換到培養(yǎng)基中的WST8上。由于生成的甲ā也是高度水溶性的，因此CCK8不能對細(xì)胞進(jìn)行染色。
8.CCK8檢測溶液對細(xì)胞是否有毒？
CCK8溶液自身因為高濃度的1Methoxy PMS的存在而具有一點(diǎn)毒性。但是，加到培養(yǎng)基中的CCK8是沒有毒性的，因為被稀釋了10倍。因此，長時間的培養(yǎng)，如隔夜或者培養(yǎng)數(shù)天是可以的。同一個細(xì)胞培養(yǎng)液在CCK8檢測后還可以用于其他細(xì)胞增殖檢測，如結(jié)晶紫檢測，中性紅檢測或者DNA熒光檢測等。由于每種細(xì)胞對于CCK8的耐受力都不同，因此在需要進(jìn)行長時間培養(yǎng)時，先檢測一下細(xì)胞在加入CCK8培養(yǎng)后的活力。
9.在做加藥實驗時，藥物對測定是否有影響？如何解決？
有時會有影響。如果藥物具有還原性，會和CCK8發(fā)生顯色反應(yīng)，增加吸光度。解決辦法：首先要確認(rèn)藥物是否有吸收，在含有藥物的培養(yǎng)基中加入CCK8，測定450 nm的吸光度，如果它的吸光度比不含藥物的培養(yǎng)基 (加CCK8)的吸光度高，則證明藥物有影響，可在加CCK8之前更換培養(yǎng)基，去掉藥物的影響。
10.每次測定的數(shù)值不一樣，是什么原因？如何解決？
可能會有以下幾個原因： 1. 當(dāng)在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)時，培養(yǎng)板zui外一圈的孔zui容易干燥揮發(fā)，由于體積不準(zhǔn)確而增加誤差。 一般情況下，zui外一圈的孔只加培養(yǎng)基，不作為測定孔用。 2. 有可能會因為CCK8沾在壁上而產(chǎn)生誤差，建議在加入CCK8后，輕輕敲擊培養(yǎng)板以幫助混勻。 3. 每孔的細(xì)胞數(shù)量過多或過少。請預(yù)先在1,000100,000個/孔范圍內(nèi)摸索條件。
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