亚洲色偷精品一区二区三区,日本欧美久久久久免费播放网,羞羞视频,免费看片的app

當(dāng)前位置:
首頁 > 技術(shù)文章 > cck8試劑實(shí)驗(yàn)過程中的疑難解答(二)
技術(shù)支持Article
cck8試劑實(shí)驗(yàn)過程中的疑難解答(二)
點(diǎn)擊次數(shù):7956 更新時(shí)間:2018-03-22
1.哪些物質(zhì)會(huì)影響cck8試劑的測(cè)定?
當(dāng)有還原性物質(zhì)存在時(shí)會(huì)影響CCK8的測(cè)定,例如含有維生素C的Glucose等 (一般培養(yǎng)基中的量不多,酚紅或血清不影響測(cè)定)。在有酚紅存在的情況下,會(huì)增加空白吸收,但不影響測(cè)定,扣除空白吸收即可。
2.在實(shí)驗(yàn)中吸光度值太高,如果不能減少細(xì)胞數(shù)量,如何解決?
可以縮短加入CCK8后的培養(yǎng)時(shí)間。例如:可以把加入CCK8試劑后的培養(yǎng)時(shí)間由2小時(shí)縮短為1小時(shí)。
3.設(shè)定參比波長(zhǎng)的目的是什么?必須設(shè)定嗎?
不一定要設(shè)定。cck8試劑在參比波長(zhǎng)沒有吸光度。設(shè)定參比波長(zhǎng)的目的是為了取出由于樣品混濁所帶來的吸收。
4.說明書上僅寫了96孔板的測(cè)定方法,如果使用24孔板貨12孔板,應(yīng)該加多少量cck8試劑?
一般情況下建議加入cck8試劑的量是培養(yǎng)基體積的1/10。
5.在cck8試劑顯色過程中,如何終止反應(yīng)?
有一下幾種方法(96孔板): 1、 在顯色反應(yīng)后,將培養(yǎng)板放置4℃冰箱內(nèi)。 2、 每孔加10 μl 0.1 M HCL溶液。 3、 每孔加10 μl 1%(w/v)的SDS(十二烷基硫酸鈉)溶液。注意:反應(yīng)停止后,應(yīng)在24小時(shí)之內(nèi)測(cè)定。
6.必須預(yù)培養(yǎng)細(xì)胞嗎?
不一定。如果要向保持細(xì)胞的狀態(tài),建議預(yù)培養(yǎng)細(xì)胞。如果不做細(xì)胞預(yù)培養(yǎng),細(xì)胞內(nèi)的脫氫酶可能會(huì)不穩(wěn)定。也有人不做細(xì)胞預(yù)培養(yǎng),但在做標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢測(cè)時(shí)需要統(tǒng)一檢測(cè)條件。
7.如果加入的藥物中含有金屬,是否會(huì)有影響?
金屬對(duì)cck8試劑顯色有影響。當(dāng)終濃度為1 Mm的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會(huì)抑制5%、15%、90%的顯色反應(yīng),使靈敏度降級(jí)。如果終濃度是10 Mm的話,將會(huì)100%抑制。
8.cck8試劑的保存條件?
在避光條件下cck8試劑在4℃可保存一年。如果需要保存較長(zhǎng)時(shí)間的話,推薦在-20℃下保存。但是cck8試劑若反復(fù)解凍和冰凍將會(huì)增加空白吸收,從而影響檢測(cè)結(jié)果,若經(jīng)常使用可將試劑存放在4℃冰箱內(nèi)保存。
9.預(yù)培養(yǎng)后,更換培養(yǎng)基需要細(xì)胞計(jì)數(shù)嗎?
一般情況下用胰蛋白酶處理對(duì)數(shù)增長(zhǎng)期的細(xì)胞,用血球計(jì)數(shù)盤計(jì)數(shù),制備成一定濃度的細(xì)胞懸液即可。如果想要精密計(jì)數(shù)細(xì)胞的話,可以預(yù)培養(yǎng)后取培養(yǎng)基用血球計(jì)數(shù)盤進(jìn)行計(jì)數(shù)。
10.cck8試劑對(duì)于不同的細(xì)胞,靈敏度是否一樣?
不一樣,懸浮細(xì)胞與貼壁細(xì)胞相比較難染色。對(duì)于貼壁細(xì)胞,一般加入cck8試劑培養(yǎng)1-4小時(shí)吸光度已經(jīng)很高,但對(duì)于懸浮細(xì)胞則可能吸光度較低,可以通過延長(zhǎng)cck8試劑的加入時(shí)間或增加細(xì)胞數(shù)量來解決。
11.懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞在數(shù)量上有何區(qū)別?
懸浮細(xì)胞由于染色比較困那,一般需要增加細(xì)胞數(shù)量和延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間。貼壁細(xì)胞染色比較容易,若細(xì)胞數(shù)量過大,有時(shí)吸光度會(huì)超過酶標(biāo)儀的讀數(shù)。
12.應(yīng)該每次做標(biāo)準(zhǔn)曲線嗎?
建議每次做。雖然細(xì)胞是一樣的,但是細(xì)胞的狀態(tài)不一定一樣,對(duì)于狀態(tài)不一樣的細(xì)胞,建議每次做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果試劑的批號(hào)不一樣,靈敏度可能會(huì)有輕微的差異,對(duì)于不同的批號(hào)建議分別做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
13.有時(shí)在藥物作用情況下,細(xì)胞已經(jīng)死亡,但是脫氫酶的活性還在,是否能計(jì)算細(xì)胞數(shù)量?
不能。由于cck8試劑是通過和細(xì)胞內(nèi)的脫氫酶進(jìn)行反應(yīng)間接反映活細(xì)胞數(shù)量,如果細(xì)胞已經(jīng)死亡,但脫氫酶的活性還在,則試劑測(cè)定的細(xì)胞數(shù)量將會(huì)比真實(shí)值高,不能真實(shí)反映活細(xì)胞數(shù)量,建議采用別的方法測(cè)定。
想了解更多cck8試劑的相關(guān)信息,咨詢
国产精品乱码一区二三区| A性色生活片久久毛片牛牛| 人妻熟人中文字幕一区二区| 再深点灬舒服灬太大了霍水| 人妻中出受孕 中文字幕在线| 亚洲精品色情app在线下载观看| 国产毛多女人视频| 噜噜狠狠色综合久色a站网址| 美国色情巜肉欲横流| 成人试看120秒体验区| 春药play揉屁股play男男| a级毛片无码免费久久真人软件| 国产精品久久久久久一区二区三区| 国产成人一区二区三区影院| 日本激情公妇厨房嗯嗯| 双性美人潮喷np窑子| 中文字幕爆乳julia女教师| 亚洲av成人无码久久精品| 无码精品a∨在线观看中文| 中文字幕亚洲一区二区三区| 免费人成在线观看网站| 寡妇好丰满奶好大有声小说| 激情 小说 亚洲 图片 伦| 护士长在办公室躁bd| 三a级做爰片免费观看玉蒲团| 免费网站看sm调教打屁股视频| 黑人大战日本娇小xxoo| 成av人片一区二区三区久久| 欧美精品久久久久a片18的试看| 岳今晚让我玩个够肥水一体探岳体| 刺激的至亲乱45部| 欧洲精品码一区二区三区免费看| 免费男女囗交视频在线观看| 他含着她的乳奶揉搓揉视频捏| 高h各种姿势调教1v1| 国产凸凹视频熟女a片| 邻居少妇张开腿让我爽了在线观看| 乌克兰极品少妇xxxx做受| 国产精品一区二区毛卡片| 大肉大捧一进一出视频| 凹凸农夫导航十次啦|